Múltiples episodios se centran en tramas LGBTQ+, incluido el arco de acoso intensificado de Kurt Hummel y su encuentro con Blaine Anderson, abiertamente gay, en "Never Been Kissed", las luchas de Santana Lopez en el armario y su plan para ser reina del baile que implica chantajear al matón Dave Karofsky en "Born This Way", y el desarrollo de parejas del mismo sexo como Klaine y Brittana. El episodio "Born This Way" estructura explícitamente las tramas en torno a la homosexualidad, la autoaceptación a través de la canción principal de Lady Gaga, y los personajes que muestran "defectos" personales en camisetas, con la camiseta de Santana "Lebanese" subrayando la identidad lesbiana como un punto focal. El creador Ryan Murphy ha declarado su intención de utilizar la serie para la visibilidad personal de personajes gay y para fomentar la aceptación mostrando familias y experiencias no tradicionales a audiencias masivas.

Esto impulsa los arcos de los personajes y las subtramas más allá de la narración orgánica, con mensajes explícitos sobre la homofobia, el acoso relacionado con la sexualidad y la aceptación de la "otredad". La diversidad racial y de discapacidad aparece en el elenco (por ejemplo, Artie en silla de ruedas, personajes como Mercedes y Tina), pero el atractivo y el peso narrativo de la temporada se basan en gran medida en el marco de la política de identidad en lugar de la inclusión incidental. La recepción de la audiencia incluyó elogios por la representación junto con críticas por la predicación excesiva, con reacciones conservadoras contra las representaciones de homosexualidad.