Evie sirve como la primera protagonista femenina jugable en la serie principal con un estilo de juego centrado en el sigilo justificado por la dinámica de hermanos y la tradición de los Asesinos, mientras que Jacob es el combatiente audaz; su historia implica liberar distritos, reclutar a la pandilla Rooks y perseguir una Pieza de Éden sin centrarse en la política de identidad moderna. Los elementos de apoyo incluyen a Ned Wynert, un hombre transgénero que actúa como dador de misiones, y Maxwell Roth, un antagonista cuyos avances hacia Jacob incluyen una escena de beso explícitamente enmarcada por el escritor principal Jeffrey Yohalem como catalizador de la sexualidad de Jacob, y el desarrollador confirma que no habrá interés amoroso femenino para Jacob en la historia principal para preservar este subtexto.